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本發明涉及一種提高CHO細胞重組蛋白表達水平的方法及其應用，表達載體、表達系統及其制備方法，屬于基因工程技術領域。本發明中的方法應用CHO細胞內源miRNAs與3′?UTR轉錄區互補結合來對篩選標記基因表達進行負性調節，進而提高目的基因的表達量。將miRNAs與3′?UTR轉錄區克隆到篩選標記基因的下游，構建真核表達載體；然后將目的基因克隆到真核表達載體獲得重組表達載體，然后將其轉染細胞，獲得CHO細胞表達系統，實現目的基因的高效表達。本發明的CHO細胞表達系統，可以顯著提高目的基因在CHO細胞中的表達水平，實現目的蛋白在CHO細胞的高產量穩定表達。

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