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本發明公開了一種哺乳動物細胞表達載體、表達系統、制備方法和應用，屬于基因工程技術領域。該表達載體包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通過將外源目的基因插入載體的多克隆位點，能夠構建TOP1 MAR?啟動子?外源基因?Poly A、啟動子?外源基因?Poly A?TOP1 MAR或者TOP1 MAR?啟動子?外源基因?Poly A?TOP1 MAR載體結構，一方面克服轉基因沉默，另一方面介導外源基因在宿主細胞中穩定、高效、持久表達。同等條件下，與不含MAR以及含1?68 MAR的載體相比，本發明中表達載體能顯著提高外源基因的表達水平，可用于重組蛋白的生產等。

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